产品货号:
GS0071
中文名称:
柱式土壤DNA提取试剂盒
英文名称:
Czup Column Soil DNA Purification Kit
产品规格:
50次|100次
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒通过Buffer SCL裂解样品,释放出基因组DNA,然后通过Buffer SP和氯仿去除蛋白等杂质。Buffer SB可以去除土壤中的腐殖酸,避免了腐殖酸对后续实验的干扰。使用本试剂盒从200mg土壤中可以获得5~10μg DNA,OD260/OD280比值一般为1.7~1.9。抽提获得的DNA可直接用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。
组分 | 50次 | 100次 |
Buffer SCL | 25mL | 50mL |
Buffer SP | 25mL | 50mL |
Buffer SB | 40mL | 80mL |
Wash Solution (concentrate) | 15mL | 30mL |
TE Buffer (pH8.0) | 5mL | 10mL |
吸附柱及收集管 | 50套 | 100套 |
保存:室温,4℃可保存更长时间。
Buffer SCL中含有刺激性化合物,操作过程中应穿上实验服,戴好乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服,防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后,请立即用清水或生理盐水冲洗,必要时寻求医生的帮助。
- 自备材料:水浴锅、小型高速离心机(最大离心力≥12000×g)、1.5mL离心管、无水乙醇、RNase A (10mg/mL)、氯仿等。
- 试剂盒初次开启,按瓶身标签说明在Wash Solution中加入相应量的无水乙醇混匀,在瓶身做好标记,于室温密封保存(15mL Wash Solution中应加入45mL无水乙醇,30mL Wash Solution中应加入90mL无水乙醇)。
- 每次使用前请检查Buffer SCL是否出现沉淀,如有沉淀,请于65℃溶解后使用。
- 提前将水浴锅调至65℃备用。
- 称取100~300mg的土壤,加入400μL 65℃预热的Buffer SCL,震荡混匀,置于65℃水浴5min。
- 震荡混匀时一定要将管底的土壤震荡起来。样品较多时可适当延长水浴时间。
- 如需得到无RNA的DNA,可在水浴后加入20μL的RNase A(10mg/mL),室温放置2~5min。
- 震荡混匀时一定要将管底的土壤震荡起来。样品较多时可适当延长水浴时间。
- 12000rpm室温离心3min。吸取上清至一个干净的1.5mL的离心管中。
- 上清液一般呈淡黄色或深棕色,具体取决于腐殖酸的含量。
- 上清液的体积一般为300~350μL。
- 上清液一般呈淡黄色或深棕色,具体取决于腐殖酸的含量。
- 加入等体积Buffer SP,颠倒混匀,冰浴10min。
- 加入Buffer SP混匀后溶液呈白色或淡黄色混浊状。
- 12000rpm室温离心3min。吸取上清至一个干净的1.5mL的离心管中。
- 加入200μL氯仿,充分混匀,12000rpm离心5min。吸取上层水相至一个干净的1.5mL的离心管中。
- 加入1.5倍体积的Buffer SB,充分混匀后用移液器将其全部加入到吸附柱中,室温静置2min。12000rpm离心30 s,倒掉收集管中废液。
- 将吸附柱放回收集管中,加入700μL Wash Solution,12000rpm离心30 s,倒掉收集管中废液。
- Wash Solution使用前请检查溶液是否按比例加入无水乙醇。
- 将吸附柱放回收集管中,加入300μL Wash Solution,12000rpm离心1min,倒掉收集管中废液。
- 将吸附柱放回收集管中,12000rpm离心2min。
- 此步绝不可省略,否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
- 取出吸附柱,放入一个新的1.5mL离心管中,在吸附膜中央加入50~100μL TE Buffer,静置3min,12000rpm离心2min,得到的DNA溶液置于-20℃保存或直接用于后续试验。
- 如果想提高DNA的得率,可重复步骤10或将TE Buffer 60℃预热。
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